ELISA檢測(cè)

　　ELISA檢測(cè)有多種樣式，有間接法ELISA檢測(cè)，夾心法ELISA檢測(cè)，競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)等，不同的ELISA檢測(cè)有不同的流程以及對(duì)樣品有不同的要求。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

間接法ELISA檢測(cè)：

　　用特異性抗原包被固相載體，加入待測(cè)的抗體樣品反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)底物顯色后測(cè)定。間接法ELISA需要客戶提供待檢測(cè)樣本和包被用的抗原。

實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將抗原吸附于固相載體表面；

　　2. 加待檢抗體，形成抗原-抗體復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體（抗抗體）；

　　4. 加入底物；

　　5. 結(jié)果判定：有色產(chǎn)物的生成量＝抗體量。

夾心法ELISA檢測(cè)：

　　用*抗原或抗體包被固相載體，加入待測(cè)的抗體或抗原反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測(cè)定，即可計(jì)算出待測(cè)抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。夾心法ELISA需要客戶提供待檢測(cè)標(biāo)本和成對(duì)抗原或抗體（亦可由我們購(gòu)買或制備抗體）。

實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)；

　　2. 加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)問，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合；

　　4. 加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)：

　　用特異性抗體包被固相載體，同時(shí)加入酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原的混合物樣本，待測(cè)抗原將與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測(cè)定，計(jì)算兩組數(shù)值之差即可推出待測(cè)抗原的量。此方法常用于測(cè)定小分子抗原。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA需要客戶提供待檢測(cè)標(biāo)本、包被抗體和酶標(biāo)抗原（亦可由我們購(gòu)買或制備抗原或抗體）。

實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將抗體吸附在固相載體表面；

　　2. 加入酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原；

　　3. 加入底物；

　　4. 結(jié)果判定：對(duì)照孔與樣品孔有色產(chǎn)物的生成量的差與未知抗原的量成負(fù)相關(guān)。

樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測(cè)抗體（也可由我們代購(gòu)）和包被用抗原。；

　　2. 檢測(cè)的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿時(shí)，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長(zhǎng)期保存應(yīng)-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測(cè)應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測(cè)應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

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