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                細胞活力檢測

                更新時間:2024-09-26

                簡要描述:

                細胞活力檢測
                tunel細胞凋亡檢測服務利用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優化的實驗方案,檢測方便,且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測(Ex/Em = 555nm/565 nm)。

                  MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化學名稱: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。

                  細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3‘-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3’-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。所以通過TUNEL法,即基因片段末端標記(Fragment End Labeling, FragEL)從而可進行凋亡細胞的檢測。
                  TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒 (橙紅熒光) 利用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優化的實驗方案,檢測方便,且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測(Ex/Em = 555nm/565 nm)。
                  細胞活力檢測操作步驟
                  1.收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度1000- 10000 /孔。
                  2.一定條件培養細胞適當時間,至細胞單層鋪滿96孔平底板,加入濃度梯度的藥物。
                  3.適當條件培養適當時間,倒置顯微鏡下觀察。
                  4.每孔加入10ul MTT溶液,繼續培養1-4h。若藥物與MTT能夠反應,可先離心后棄去培養液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養液。
                  5.終止培養,小心吸去孔內培養液。
                  6.每孔加入100ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
                  活力計算:
                  細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100
                  A(加藥):具有細胞、MTT溶液和藥物溶液的孔的吸光度
                  A(空白):具有培養基和MTT溶液而沒有細胞的孔的吸光度
                  A(0加藥):具有細胞、MTT溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
                  細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
                  tunel細胞凋亡檢測服務應用范圍
                  1.抗腫瘤藥物篩選
                  2.細胞毒性試驗
                  3.腫瘤放射敏感性測定
                  細胞活力檢測服務期限
                  1-2周。


                毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術研發和科研技術服務的公司,公司建有專業的分子生物學、細胞生物學、組織病理學實驗室,為眾多生物醫藥企業、科研機構、醫院及高校提供分子生物學、細胞生物學、病理形態學等方面科研服務。公司核心團隊曾在國內外許多優秀學府從事過多年研發工作,秉承“為客戶創造價值,為員工實現夢想,為社會創造財富"的經營理念,堅持以技術創新為先導,以服務質量為根本,為中國生物醫藥和科學研究提供優質的產品和技術服務。


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