腺病毒包裝

腺病毒包裝(Adenovirus，Ad)是一種無(wú)包膜的線狀雙鏈DNA病毒，其復(fù)制不依賴(lài)于宿主細(xì)胞的分裂。有近50個(gè)血清型，大多數(shù)Ad載體都是基于血清型2和5，通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達(dá)E1和E3基因的細(xì)胞中復(fù)制，因此是一種適用于治療的高效控制系統(tǒng)。

重組腺病毒（AdV）是人血清5型腺病毒（Ad5），一種復(fù)制缺陷的腺病毒載體系統(tǒng)，在基因治療、基礎(chǔ)生命科學(xué)研究等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。腺病毒缺失了早期表達(dá)基因序列E1和E3區(qū)。E1是腺病毒復(fù)制所必須的，E1的缺失使其不能自身復(fù)制，只能依靠包裝細(xì)胞如293A細(xì)胞提供的反式互補(bǔ)進(jìn)行復(fù)制擴(kuò)增，以此保證腺病毒的安全性。

腺病毒包裝特點(diǎn)：

1）幾乎可以感染所有類(lèi)型的細(xì)胞。

2）可以獲得復(fù)制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。

3）病毒滴度高，產(chǎn)生病毒經(jīng)過(guò)濃縮后可以達(dá)到1012 PFU/mL，能有效的進(jìn)行增殖。

注：plaque forming unit/ml，空斑形成單位，感染性滴度的單位一般表示為PFU/ml。

4）腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣，制備容易，操作簡(jiǎn)單。

5）感染細(xì)胞時(shí)，不整合到染色體中，不存在激活致癌基因或插入突變等危險(xiǎn)，生物安全性高。

簡(jiǎn)要流程：

1）構(gòu)建表達(dá) siRNA/miRNA 的腺病毒載體。

2）采用 PacI 消化純化的質(zhì)粒。

3）消化好的腺病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染 293A 細(xì)胞，收獲細(xì)胞以制備病毒粗提液。

4）將病毒粗提液感染293A細(xì)胞以擴(kuò)增病毒。

5）分裝，-80℃保存。

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